Istaknuta slika kompleta za PCR u stvarnom vremenu virusa Monkeypox

Komplet za PCR u realnom vremenu virusa majmunskih boginja

Kratki opis:

Mačka.Ne	B001P-01	Veličina	48 testova/pribor
Primjerak	Serum/ eksudat lezije	Trans.& Sto.Temp.	-25～-15℃
Format	Premiks je liofiliziran i alikvotiran u 8 trakastih PCR epruveta
Primjenjivi instrument	PCR instrument u stvarnom vremenu kao što su ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio i BTK-8

Pošaljite nam e-poštu

Pojedinosti o proizvodu

Oznake proizvoda

Detalji o proizvodu

Namjena

Koristi se za otkrivanje virusa majmunskih boginja u ljudskom serumu ili uzorcima eksudata lezija korištenjem PCR sustava u stvarnom vremenu.

Test Princip

Ovaj proizvod je Taqman® PCR testni sustav u stvarnom vremenu temeljen na fluorescentnoj sondi.Specifični primeri i sonde dizajnirani su za detekciju F3L gena virusa majmunskih boginja.Unutarnja kontrola usmjerena na ljudski očuvani gen prati prikupljanje uzorka, rukovanje uzorkom i PCR proces u stvarnom vremenu kako bi se izbjegli lažno negativni rezultati.Komplet je liofilizirani sustav s prethodnom mješavinom, koji uključuje materijale potrebne za detekciju virusa majmunskih boginja: enzim za amplificiranje nukleinske kiseline, enzim UDG, reakcijski pufer, specifični primer i sondu.

Glavni sadržaj

Isporučene komponente navedene su u tablici.

Komponente	Paket	Sastojak
Virus majmunskih boginjaLiofilizirani predsmjesa	8 trakastih PCR epruveta× 6 vrećica	Primeri, sonde, dNTP/dUTP mješavina, Mg2+, Taq DNA polimeraza, UDG enzim
MPV pozitivna kontrola	400 μL×1 epruveta	DNA sekvence koje sadrže ciljni gen
MPV negativna kontrola	400 μL×1 epruveta	DNA sekvence koje sadrže segment ljudskog gena
Otopina za otapanje	1 mL×1 tuba	Stabilizator
Potvrda o sukladnosti	1 komad	/

Tijek operacije

1. UzorakKolekcija:Uzorak treba prikupiti u sterilne epruvete u skladu s tim

sa standardnim tehničkim specifikacijama.

2. Priprema reagensa (područje za pripremu reagensa)

Izvadite komponente kompleta, balansirajte ih na sobnoj temperaturi za korištenje u stanju mirovanja.

3. Obrada uzoraka (područje za obradu uzoraka)

3.1 Ekstrakcija nukleinske kiseline

Preporuča se uzeti 200 μL tekućih uzoraka, pozitivne kontrole i negativne kontrole za ekstrakciju nukleinske kiseline, u skladu s odgovarajućim zahtjevima i postupcima kompleta za ekstrakciju virusne DNA.

3.2 Otapanje liofiliziranog praha i dodavanje šablona

Pripremite liofilizirani predsmjesu virusa majmunskih boginja prema broju uzoraka.Za jedan uzorak potrebna je jedna PCR epruveta koja sadrži prašak liofilizirane mješavine.Negativna kontrola i pozitivna kontrola trebaju se tretirati kao dva uzorka.

(1) Dodajte 15 μL otopine za otapanje u svaku PCR epruvetu koja sadrži liofilizirani predsmjesu, zatim dodajte 5 μL ekstrahiranih uzoraka/negativne kontrole/pozitivne kontrole u svaku PCR epruvetu.

(2) Čvrsto pokrijte PCR epruvete, trzajte PCR epruvete rukom dok se liofilizirani prah potpuno ne otopi i pomiješa, sakupite tekućinu na dno PCR epruveta trenutnim centrifugiranjem pri maloj brzini.

(3) Ako za detekciju koristite uobičajeni PCR instrument u stvarnom vremenu, tada izravno prenesite PCR epruvete u područje pojačanja;ako koristite BTK-8 za detekciju, trebate izvršiti sljedeće radnje: prenijeti 10 μL tekućine iz PCR epruvete u jažicu reakcijskog čipa BTK-8.Jedna PCR epruveta odgovara jednoj jažici na čipu.Tijekom pipetiranja, uvjerite se da je pipeta okomita pod kutom od 90 stupnjeva.Vrhove pipete s aerosolnom barijerom treba postaviti u sredinu jažice s umjerenom snagom i prestati gurati pipetu kada dođe do prve brzine (kako bi se izbjegli mjehurići).Nakon što su jažice napunjene, izvadite membranu reakcijskog čipa da pokrije sve jažice i čip se zatim prenosi u područje detekcije pojačanja.

4. PCR amplifikacija (područje detekcije)

4.1 Stavite PCR epruvete/reakcijski čip u reakcijski spremnik i postavite nazive svake reakcijske jažice odgovarajućim redoslijedom.

4.2 Postavke fluorescencije detekcije: (1) virus majmunskih boginja (FAM);(2) Interna kontrola (CY5).

4.3 Pokrenite sljedeći protokol ciklusa

Protokol ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

Koraci		Temperatura	Vrijeme	Ciklusi
1	Preddenaturacija	95 ℃	2 min	1
2	Denaturacija	95 ℃	10 s	45
2	Žarenje, ekstenzija, dobivanje fluorescencije	60 ℃	30 s	45

Protokol BTK-8:

Koraci		Temperatura	Vrijeme	Ciklusi
1	Preddenaturacija	95 ℃	2 min	1
2	Denaturacija	95 ℃	5 s	45
2	Žarenje, ekstenzija, dobivanje fluorescencije	60 ℃	14 s	45

5. Analiza rezultata (pogledajte korisnički priručnik instrumenta)

Nakon reakcije, rezultati će se automatski spremiti.Pritisnite "Analiziraj" za analizu, a instrument će automatski interpretirati Ct vrijednosti svakog uzorka u stupcu rezultata.Negativni i pozitivni rezultati kontrole moraju biti u skladu sa sljedećim "6. Kontrola kvalitete".

6. Kontrola kvalitete

6.1 Negativna kontrola: Nema Ct ili Ct>40 u FAM kanalu, Ct≤40 u CY5 kanalu s normalnom krivuljom pojačanja.

6.2 Pozitivna kontrola: Ct≤35 u FAM kanalu s normalnom krivuljom pojačanja, Ct≤40 u CY5 kanalu s normalnom krivuljom pojačanja.

6.3 Rezultat je valjan ako su zadovoljeni svi gore navedeni kriteriji.U suprotnom, rezultat je nevažeći.

Tumačenje rezultata

Mogući su sljedeći rezultati:

	Ct vrijednost FAM kanala	Ct vrijednost CY5 kanala	Tumačenje
1#	Nema Ct ili Ct>40	≤40	Negativan na virus majmunskih boginja
2#	≤40	Bilo kakav rezultat	Pozitivan na virus majmunskih boginja
3#	40～45	≤40	Ponovno testiranje;ako je i dalje 40~45, javite kao 1#
4#	Nema Ct ili Ct>40	Nema Ct ili Ct>40	Neispravno

BILJEŠKA: Ako dođe do nevaljanog rezultata, uzorak treba uzeti i ponovno testirati.

Informacije o narudžbi

ime proizvoda	Mačka.Ne	Veličina	Primjerak	Rok trajanja	Trans.& Sto.Temp.
Komplet za PCR u realnom vremenu virusa majmunskih boginja	B001P-01	48 testova po kompletu	Serum/ eksudat lezije	12 mjeseci	-25～-15℃